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產(chǎn)品名稱:乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法

產(chǎn)品型號(hào):BC0415

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法
測(cè)定意義:ACC在生物體內(nèi)催化乙酰輔酶A羧化生成丙二酰輔酶A,是脂肪酸和許多次生代謝產(chǎn)物合成的關(guān)鍵酶。ACC的活性在一定程度上決定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
測(cè)定原理:ACC能夠催化乙酰輔酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰輔酶A、ATP和無機(jī)磷,通過鉬酸銨定磷法測(cè)定無機(jī)磷的增加量來測(cè)定ACC活性。

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BC0415乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法的詳細(xì)資料:

乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法

樣本的前處理

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 660nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 酶促反應(yīng)試劑的配制和預(yù)熱:在試劑二瓶中加入 2.5mL 試劑一,充分溶解混勻;在試劑三瓶中加入 2mL 蒸餾水,充分溶解混勻;將試劑一、二、三在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃ (其它物種)預(yù)熱 10 分鐘。

3、定磷試劑的配制:按 H2O: 試劑四:試劑五:試劑六=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷試劑 應(yīng)為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍(lán)色則為磷污染,定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。注意:配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

4、0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制:將試劑七 20 倍稀釋,即取 0.5mL 試劑七加 9.5 蒸餾水,充分混勻。

乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法

ACC 活性計(jì)算: 1、按組織蛋白濃度計(jì)算:定義:每小時(shí)每毫克組織蛋白產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個(gè) ACC 活力單位。 ACC (μmol/h/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總)×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷ (V 樣×Cpr)÷T=10×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算:定義:每小時(shí)每 g 組織產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個(gè) ACC 活力單位。 ACC (μmol/h /g 鮮重)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總)×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 總÷ (W× V 樣÷V 樣總)÷T=10×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W 3、 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:定義:每小時(shí)每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個(gè) ACC 活力單位。 ACC (U/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總)×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 總÷ (500× V 樣÷V 樣總)÷T=0.02×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) C 標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.5μmol/mL;V 總:酶促反應(yīng)總體積,0.1mL;V 樣:加入樣本體積,0.01mL ;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,0.5 小時(shí);Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

ACC 能夠催化乙酰輔酶 A、NaHCO3和 ATP 生成丙二酰輔酶 A、ATP 和無機(jī)磷,通過鉬酸銨定磷法測(cè)定無機(jī)磷的增加量來測(cè)定 ACC 活性。

 

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